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紫外可見分光光度計含量測定方法-上海奧析UV1800PC
更新時間:2016-03-25 點擊次數:5208

IgG含暈測定法

(紫外可見分光光度計含量測定方法-上海奧析UV1800PC紫外-可見分光光度法)

本法系依據免疫球蛋白G (IgG) 與相應的抗體特異

性結合后,在適宜的電解質、溫度、p H 條件下,產生凝

集反應,形成抗原-抗體復合物,根據供試品的吸光度求

出供試品中I g G的含量。

試劑 1 )緩沖液稱取三羥甲基氨基甲烷(Tris)

12. 42 g ,氯化鈉9g、聚乙二醇6000 50g、牛血淸白蛋白

(BSA) lg、*(NaN3) l g ,加水溶解,用l.Omol/L

鹽酸調p H 值至7. 4,加水稀釋至1000ml。

( 2 )抗人I g G血清按說明書要求將凍干抗人IgG

清復溶,按標示效價取一定量抗人I g G血清,加緩沖液稀

釋至抗體zui終效價為1 : 4 (例如抗人I g G血清效價為1 ••

100,量取原液2 m l加抗體緩沖液48ml),充分混勻,

0.45!11膜過濾。4°C保存備用。

IgG標準品溶液的制備用生理氯化鈉溶液將I g G

準品在每l m l0.2?6 . 0 m g范圍內做適當的系列稀釋

(通常做5個稀釋度)。

供試品溶液的制備用生理氯化鈉溶液將供試品稀釋

成高、中、低3 個稀釋度,其I gG含量均應在標準曲線范

圍內。測定法取供試品溶液1(^1,加人已預熱至37°C

抗體液l m l ,混勻,每個稀釋度做2 管,置37°C水浴中保

1小時,充分混勻,照紫外-可見分光光度法(通則

0401),在波長3 4 0 n m處分別測定吸光度。

I g G標準品溶液10M1替代供試品溶液,同法

操作。

計算標準品和供試品不同稀釋度溶液的吸光度的均

值。以標準品溶液的I gG含量的對數對其相應的吸光度的

對數作直線回歸,求得直線回歸方程,相關系數應不低于

0.99;然后將供試品溶液吸光度的對數值代人直線回歸方

程,求得值的反對數,再乘以稀釋倍數,求取每lml供試

品溶液I gG含量,再由供試品各稀釋度I g G含量求平均

值,即為供試品I gG含量(g/L) 。

【附注】1 ) 全部反應管必須在1 0分鐘內測量完畢。

( 2 )設置紫外分光光度計狹縫寬度(Slit Width)

2 n m 0

( 3 )每次測定可根據供試品I gG含量,適當調整標準

品溶液中I gG含量范圍。

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